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长链二烷基羰花青化合物，特别是DiI(MW：933.88)，广泛应用于固定和非固定的组织与细胞中，进行顺行或逆行的神经示踪分析。DiI不会影响细胞的活力、生长以及基本生理特性。DiI标记运动神经元，可在培养基条件下持续跟踪长达四周，在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元，0.2～0.6mm/每天/固定标本，在活体组织里，可以达到6mm/每天。经过醛固定的组织，DiI的扩增可以持续长达1～2年。一般情况下未标记的染料不会向非标记的细胞转移，除非质膜被破坏，比如切片部位。

1. 以无血清培养基悬浮细胞密度为1X106个/mL。
   
2. 每1mL细胞悬液加入5μL细胞标记液，混匀。
   
3. 37℃孵育1～20分钟。不同的细胞类型所用的孵育条件不一样，可参考表格1，初始孵育时间可选择20分钟，随后再进行优化。
   
4. 37℃，1500rpm 5分钟离心标记悬浮液。
   
5. 去上清，用37度的培养基轻轻悬浮细胞。
   
6. 重复两次以上的洗涤步骤。
   
7. 放置10分钟后进行荧光测量。

1. 培养细胞至所需的汇合度。
   
2. 取出爬片，吸去培养基，放到盖玻片湿盒中。
   
3. 准备标记，每1mL新鲜培养基中加入5μL的标记液。
   
4. 吸取100μL盖玻片周围的染色介质，轻轻铺匀，使之盖满整个爬片。
   
5. 37℃孵育细胞，不同的细胞类型所用的孵育条件不一样，可参考表格1.初始孵育时间可选择20分钟，随后再进行优化。
   
6. 去掉染色介质，用新鲜预热的培养基孵育10分钟，再更换以新的预热的培养基孵育10分钟，重复洗涤盖玻片三次。